Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型高血压患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身突变到消失1改进型肝炎药理学腹泻的实质性率在婴幼儿时期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身突变乙型肝炎的婴幼儿里面有70%在血清反转后10年内患上肝炎，而随访15年的婴幼儿这一分之一缩减到84%。远比之下，分之二药理学1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的中风有助于还没获取充分的研究工作。

越来越多的人开始应用于分期管理系统来界定1改进型肝炎的实质性：个锥体在消失多种肝细胞自身突变时离开第1阶段性，消失血糖异常时离开第2阶段性，消失腹泻时离开第3阶段性。一些多发肝细胞自身突变乙型肝炎的个锥体，在1期和2期，实质性较慢，并持续发展为中风的1改进型肝炎。我们之前详细描述了一一组在首次样品到多种肝细胞自身突变样本后至更少10年无肝炎的总括慢实质性者，这一组病征人数更少，但构造颇为明确。随后，我们发现肝细胞自身细胞内特异性CD8+T细胞内反应会在实质性快速的病征里面基本不存在，但在近期中风和长期存在的肝炎病征里面很容易样品到。这可能表明，与实质性病征远比，这些病征自身免疫反应会的平衡增强。

晚期研究工作表明，尽管平衡性T细胞内(Treg)量正常，但肝炎病征存在一些有助于缺陷，其里面之外对IL-2的反应会能力减缓。此外，肝炎病征里面的波动CD4+T细胞内可能对平衡更具抵抗性，发挥为波动T细胞内的依赖性减弱，连续性产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及细胞内经历的CD4+T细胞内里面IL-2反应会减弱。本研究工作的旨在是详细描述了CD4+平衡性T细胞内(Treg)在一小群总括快速实质性者里面的构造，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的中轴研究工作，在21岁以下确诊的病征亲属里面锥体检1改进型肝炎的险恶主因。我们之前详细描述了长期快速实质性者的构造，他们依然多重肝细胞自身突变乙型肝炎超过10年，但没消失肝炎的药理学腹泻，慢性或非受虐自身免疫。随后，10名继续依然无肝炎并想提供大量血液样本的快速实质性者纳入T和B细胞内有助于深入研究。在现有的研究工作里面，8名慢实质性者(SP一组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞自身突变乙型肝炎。所有的行动者都处于1改进型肝炎实质性的1期，尽管一些人随后保住了肝细胞自身突变对某些细胞内的乙型肝炎反应会，然而，一名病征已经处于2期至更少6年，但没消失药理学腹泻，一名病征被诊断为肝炎，该人会72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究里面对该供锥体顺利完成了单独风险评估。受控外周血单个核能细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内术和T细胞内依赖性试验风险评估供锥体里面Treg的频谱、表改进型和有助于。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、比如说和重返)顺利完成无监督聚类深入研究，风险评估Treg表改进型。

结果：与肥胖症供锥体远比，来自慢实质性锥体的潜意识CD4+T细胞内的监督聚类表明，激活的潜意识CD4+ Treg频谱缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR涉及细胞内(GITR)解读缩减有关。一名HbA1c下降的病征与实质性快速者和匹配的对照一组远比，Treg谱有所不尽相同。有助于结果表明，与肥胖症供锥体远比，来自快速实质性锥体的Treg特异性的CD4+波动T细胞内依赖性明显受到影响。发挥为对波动CD4+T细胞内CD25和CD134解读的依赖性缩减。

左图1 深入的表改进型深入研究表明，CD4+Treg亚改进型在慢实质性字段里面缩减。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物解读断定成10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个不尽相同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个链表推选一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在链表一组周围上色。每个链表里面的饼左图暗示单个上面的解读级别。(b)每个元聚类的热左图，以表明整锥体上面解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)降解左图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)远比之下原姪量为每个metacluster装终点站左图(原姪量> 0.05%)已确定为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。绿色红色推选捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频谱的缩减是实质性快速的左图案。分级门控(a - f)和大豆深入研究(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的推选性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成受控，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(小点)和SP(布氏)一组以及供锥体SP 606(绿色)里面CD25+ cd127的频谱统计左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控姪集的装终点站左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)油菜簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，交叉醒目的簇被鉴别为SP和HD字段两者之间的不尽相同。(j)装终点站左图表明了在SP(布氏)和HD(灰点)一组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的远比之下原姪量(分之一)。(k)直方左图表明每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上面远比之下解读与氛围解读(浅蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一路上，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇里面上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩验

左图3 与肥胖症献血者远比，实质性快速者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热左图(sp606不之外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读联接，表明直方左图(c)和统计左图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和验，p< 0.07(绿色)所有供锥体之外，p< 0.05(浅蓝色)供锥体SP 606和匹配的HD不之外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(绿色)联接，表明直方左图(e)和统计左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩验

左图4 来自快速实质性的CD4+ treg细胞内控制波动CD4+T细胞内的能力减缓。SP一组用浅蓝色的终点站和红色暗示，HD一组用红色的终点站和红色暗示，绿色的终点站/红色暗示供锥体sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，人才培养3翌日顺利完成流式细胞内术样品。(a-d)与CD4+；也者远比之下应的treg人才培养(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比率。应用于乙型肝炎对照(激活的响应细胞内仅有treg)计数依赖性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 波动CD4+T细胞内对快速实质性的T细胞内增殖的依赖性更敏感性。SP一组用浅蓝色的终点站和红色暗示，HD一组用红色的终点站和红色暗示，绿色的终点站/红色暗示供锥体sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，人才培养3翌日顺利完成流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因姪深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同完成人才培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性调升(b)。(c,d) CD25依赖性调升(c)和CD134依赖性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们结论的假设是，来自快速实质性姪的增殖潜意识CD4+Treg在GITR解读里面获取了扩展和非常丰富，突显了促使研究工作Treg在1改进型肝炎风险个锥体里面的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28